雞白細胞介素6（IL-6）elisa試劑盒使用(yong)說明書
本試劑盒僅供研究使用(yong)。
檢(jian)測(ce)范圍： 96T
1 ng/L -40 ng/L
使用目的：
本試劑(ji)盒用于測(ce)定雞血清(qing)，血漿及相關液體樣(yang)本中白(bai)細胞介素6（IL-6）含(han)量。
實驗原理(li)
本(ben)試劑盒應用雙(shuang)抗體(ti)夾心(xin)法測定標(biao)本中雞白細胞介(jie)素6（IL-6）水平(ping)。用純化的雞白細胞介素6（IL-6）抗體包被(bei)微孔板(ban)，制成固相抗體，往包被(bei)單抗的微孔中依(yi)次加入白細胞介素(su)6（IL-6），再與HRP標記的白細胞(bao)介素6（IL-6）抗(kang)體結合，形成(cheng)抗(kang)體-抗原-酶(mei)標(biao)抗體(ti)復合物，經過che底洗滌后加底物(wu)TMB顯(xian)色。TMB在HRP酶的(de)(de)(de)催化(hua)(hua)下(xia)轉化(hua)(hua)成藍色，并在酸的(de)(de)(de)作用下(xia)轉化(hua)(hua)成最終的(de)(de)(de)黃(huang)色。顏色的(de)(de)(de)深淺(qian)和樣(yang)品(pin)中的(de)(de)(de)白(bai)細(xi)胞介(jie)素6（IL-6）呈正(zheng)相關。用酶標儀在450nm波長下(xia)測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞白細(xi)胞(bao)介素6（IL-6）濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biao)準品（80 ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被(bei)板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品(pin)稀(xi)釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣(yang)品(pin)稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明(ming)書 | 1份(fen) |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜(mo) | 2張 |
6 | 顯色劑B液(ye) | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本(ben)要求
1．標本采集(ji)后盡(jin)早進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按(an)相關文(wen)獻進(jin)行，提取(qu)后應盡(jin)快進(jin)行實驗。若(ruo)不(bu)能馬上進(jin)行試驗，可將(jiang)標本放于-20℃保存，但應避(bi)免反(fan)復凍融
2．不能(neng)檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物(wu)酶(mei)的（HRP）活性。
操作步(bu)驟(zou)
1. 標(biao)準品(pin)的稀(xi)釋(shi)(shi)：本試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)供原(yuan)倍(bei)標(biao)準品(pin)一(yi)支，用戶(hu)可(ke)按(an)照下列圖表在小試(shi)(shi)管(guan)中進行稀(xi)釋(shi)(shi)。
40 ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標(biao)準品加入150μl標準品稀(xi)釋液(ye) |
20 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
10 ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
5 ng/L | 2號標準品 | 150μl的(de)3號標(biao)準品加入150μl標準品(pin)稀釋液(ye) |
2.5 ng/L | 1號標準品 | 150μl的(de)2號標準品加入150μl標準品(pin)稀釋液 |
2. 加樣：分別設空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對照孔不加樣品及酶(mei)標試劑(ji)，其(qi)余各步操(cao)作(zuo)相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上(shang)標準品準確加樣50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然(ran)后再(zai)加(jia)待測(ce)樣品10μl（樣(yang)品最終稀釋(shi)度為5倍）。加樣(yang)將樣(yang)品加于酶標板孔底部，盡(jin)量不觸及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻(yun)。
3. 溫育：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板后置37℃溫育(yu)30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液(ye)用蒸餾水30倍稀釋(shi)后(hou)備用
5. 洗(xi)滌：小心揭(jie)掉封板膜，棄去液體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此(ci)重復(fu)5次，拍干。
6. 加酶(mei)：每孔(kong)加入酶(mei)標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作(zuo)同3。
8. 洗滌(di)：操作同5。
9. 顯色：每孔(kong)先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光(guang)顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測(ce)定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定應(ying)在加終止(zhi)液后(hou)15分(fen)鐘以(yi)內進(jin)行。
注意(yi)事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃(nong)洗滌(di)液可能會(hui)有結晶析出，稀釋(shi)時(shi)可(ke)在水浴中加溫助(zhu)溶，洗滌(di)時不影(ying)響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測(ce)定的(de)同時做標(biao)準曲(qu)線，最好做復孔(kong)。如標(biao)本(ben)中(zhong)待測(ce)物質含量過(guo)高（樣(yang)本(ben)OD值大于標準(zhun)品孔(kong)第(di)一孔(kong)的OD值(zhi)），請先用樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一(yi)定倍數（n倍）后(hou)再測定，計算(suan)時請最后(hou)乘以總(zong)稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限(xian)一次(ci)性使(shi)用，以避免交(jiao)叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有(you)效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
