人T淋巴細胞白血病病毒p19（HTLV p19）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供(gong)研究使用(yong)。
檢測范圍： 48T
1pg/ml -50 pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(ce)定人(ren)血(xue)清,血漿及相(xiang)關液體樣(yang)本中T淋(lin)巴細胞白血病病毒p19（HTLV p19）含量。
實驗(yan)原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法(fa)測定標(biao)本中人T淋(lin)巴細(xi)胞(bao)白(bai)血病(bing)病(bing)毒(du)p19（HTLV p19）水平。用(yong)純化的(de)人T淋巴細(xi)胞白血病病毒p19（HTLV p19）抗(kang)體(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制成固相抗(kang)體(ti)，往包被單抗(kang)的微(wei)孔(kong)中依次加入T淋巴細(xi)胞白血病(bing)病(bing)毒p19（HTLV p19），再(zai)與(yu)HRP標記的(de)T淋巴細胞白血病(bing)(bing)病(bing)(bing)毒(du)p19（HTLV p19）抗體(ti)結(jie)合，形成抗體(ti)-抗原-酶標抗體(ti)復合物，經過che底洗滌后加底物TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的催化下(xia)轉(zhuan)化成藍(lan)色，并在酸的作(zuo)用下(xia)轉(zhuan)化成最終的黃色。顏色的深淺(qian)和樣(yang)品中的T淋巴細胞白血病病毒p19（HTLV p19）呈正相(xiang)關。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guo)標準曲線計算樣(yang)品中人(ren)T淋(lin)巴細胞白血病病毒p19（HTLV p19）濃度。
試劑(ji)盒組(zu)成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶(ping) | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標(biao)試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標(biao)準品（80 pg/ml） | 0.5ml×1瓶(ping) |
3 | 酶標包被板(ban) | 12孔(kong)×4條 | 9 | 標準品稀(xi)釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品(pin)稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說(shuo)明(ming)書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶(ping) | 11 | 封板(ban)膜 | 2張 |
6 | 顯色(se)劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封(feng)袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行，提取(qu)后應(ying)盡快進(jin)行實(shi)驗。若(ruo)不能馬(ma)上進(jin)行試驗，可將(jiang)標本放于-20℃保存，但應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融
2．不能(neng)檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣(la)根過氧化物酶的（HRP）活(huo)性(xing)。
操作步(bu)驟(zou)
1. 標準品(pin)(pin)的稀釋：本試劑盒提供(gong)原倍標準品(pin)(pin)一(yi)支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jin)行稀釋。
40 pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原(yuan)倍標準品(pin)加入150μl標(biao)準品稀釋液 |
20 pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品(pin)加(jia)入150μl標準品(pin)稀釋液 |
10 pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品(pin)加入150μl標準品(pin)稀(xi)釋液 |
5 pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號(hao)標準品加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀釋液 |
2.5 pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品(pin)稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步(bu)操作(zuo)相同(tong)）、標準孔、待測樣品孔。在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)標準品(pin)準確(que)加(jia)樣50μl，待測樣品孔中(zhong)先(xian)加樣品稀(xi)釋液40μl，然后再加待測(ce)樣(yang)品10μl（樣品(pin)最終稀釋度為5倍）。加樣(yang)將樣(yang)品(pin)加于酶標板孔底部，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置(zhi)37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液(ye)體，甩(shuai)干，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液，靜置(zhi)30秒(miao)后棄去，如此重復5次，拍(pai)干。
6. 加(jia)酶：每孔加(jia)入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同(tong)3。
8. 洗(xi)滌(di)：操(cao)作同(tong)5。
9. 顯(xian)色：每(mei)孔先加(jia)入顯(xian)色劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色(se)10分(fen)鐘.
10. 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依(yi)序(xu)測(ce)量各(ge)孔的吸光度（OD值(zhi)）。 測(ce)定應在加終止液(ye)后(hou)15分鐘以(yi)內進行。
注(zhu)意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃(nong)洗滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shi)不(bu)影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測(ce)定的同時做標(biao)準曲線，最好做復孔。如標(biao)本中待測(ce)物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先(xian)用樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定(ding)倍數（n倍）后再測定，計算時請(qing)最后乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋倍數（×n×5）。
5． 封板(ban)膜只(zhi)限一次性(xing)使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑(ji)盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
