大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠褪黑素（MT）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用(yong)(yong)雙抗(kang)體(ti)一步夾心(xin)法酶(mei)(mei)聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包(bao)被(bei)大(da)鼠褪(tun)黑素（MT）捕獲抗(kang)體(ti)的(de)(de)(de)包(bao)被(bei)微孔(kong)中，依(yi)次加入標(biao)本、標(biao)準品(pin)、HRP標(biao)記的(de)(de)(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經(jing)過(guo)溫育(yu)并(bing)*洗滌。用(yong)(yong)底物(wu)TMB顯色，TMB在過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)催化(hua)下(xia)(xia)轉化(hua)成藍色，并(bing)在酸的(de)(de)(de)作用(yong)(yong)下(xia)(xia)轉化(hua)成終的(de)(de)(de)黃色。顏(yan)色的(de)(de)(de)深淺和樣品(pin)中的(de)(de)(de)大(da)鼠褪(tun)黑素（MT）呈正相關。用(yong)(yong)酶(mei)(mei)標(biao)儀在450nm 波(bo)長下(xia)(xia)測定吸光度(du)（OD 值），計算(suan)樣品(pin)濃度(du)。

樣本處理及要求

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本(ben)溶(rong)血會影響后(hou)檢(jian)測(ce)結果，因此溶(rong)血標本(ben)不宜進(jin)行(xing)此項檢(jian)測(ce)。

需要而未提供的試劑(ji)和器材(cai)

• 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

• 高精度加樣器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒(heng)溫箱

• 蒸餾(liu)水(shui)或去離子(zi)水(shui)

試劑盒組成

大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒備注：

1.  標準(zhun)品(pin)濃(nong)度依次為：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.  經過(guo)大(da)量正常標本(ben)(ben)(ben)檢驗(yan)，標本(ben)(ben)(ben)的(de)正常濃度(du)值均在試劑(ji)盒提(ti)供的(de)檢測(ce)范圍內，實驗(yan)過(guo)程中直接取50μL樣本(ben)(ben)(ben)上樣即可。當有部分樣本(ben)(ben)(ben)值超過(guo)zui大(da)標準(zhun)品(pin)濃度(du)時(shi)，可用樣本(ben)(ben)(ben)稀(xi)釋(shi)液將標本(ben)(ben)(ben)進行適當稀(xi)釋(shi)后再進行實驗(yan)。

注意事(shi)項

• 嚴格按照規定(ding)的時間(jian)和溫(wen)度進行溫(wen)育以保(bao)證準確結果。所有試(shi)劑(ji)都必(bi)須在使用前達到室溫(wen)20-25℃。使用后立即冷藏保(bao)存(cun)試(shi)劑(ji)。

• 洗板(ban)不(bu)正確(que)可(ke)以導致(zhi)不(bu)準確(que)的結果。在加入底物前確(que)保盡量(liang)吸(xi)干孔內(nei)液體。溫育過(guo)程中不(bu)要讓微孔干燥(zao)掉。

• 消除板底殘留的液體(ti)和手指印(yin)，否則影響(xiang)OD值。

• 底(di)物顯色(se)液(ye)應(ying)呈無色(se)或很淺的(de)(de)顏(yan)色(se)，已經變藍(lan)的(de)(de)底(di)物液(ye)不(bu)能使用。

• 避免試劑和標本的交(jiao)叉(cha)污染以免造成錯誤結果。

• 在(zai)儲存(cun)和溫育時避免強光直接照射。

• 平衡(heng)至室(shi)溫后再打開(kai)密(mi)封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

• 任何反應試劑不能接觸漂(piao)(piao)白溶劑或(huo)漂(piao)(piao)白溶劑所散發(fa)的強烈氣體。任何漂(piao)(piao)白成(cheng)分都會破壞(huai)試劑盒中反應試劑的生物活性。

• 不能使用(yong)過(guo)期產(chan)品。

• 如(ru)果可能傳播疾病，所有的(de)(de)樣品(pin)都應管理(li)好(hao)，按照規定的(de)(de)程序處(chu)理(li)樣品(pin)和檢測裝置。

試劑準備

試劑(ji)盒從冷(leng)藏環(huan)境(jing)中取出應在(zai)室溫平(ping)衡(heng)后(hou)方可使用。

20×洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)的稀(xi)釋(shi)(shi)：蒸(zheng)餾水按1：20稀(xi)釋(shi)(shi)，即1份(fen)20×洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)加19份(fen)蒸(zheng)餾水。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封袋密封放(fang)回(hui)4℃。

2.  設置標準品(pin)孔和樣本(ben)孔，標準品(pin)孔各(ge)加(jia)不同(tong)濃度的(de)標準品(pin)50μL；

3.  樣本(ben)孔中(zhong)加入待測(ce)樣本(ben)50μL；空白孔不加。

4.  除(chu)空白孔(kong)(kong)外，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)中(zhong)每孔(kong)(kong)加入(ru)辣(la)根(gen)過氧化物酶（HRP）標(biao)記的檢測(ce)抗(kang)體100μL，用(yong)封(feng)(feng)板膜封(feng)(feng)住反應孔(kong)(kong)，37℃水浴鍋或恒(heng)溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.  棄(qi)去液(ye)體，吸(xi)水紙上拍干，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置1min，甩去洗(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水紙上拍干，如此重復(fu)洗(xi)板(ban)5次（也可用洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban)）。

6.  每孔加入(ru)底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避光(guang)孵育15min。

7.  每(mei)孔加入終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處(chu)測定各孔的OD值。

實驗結果計算(suan)

以所測(ce)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)的OD值為橫坐標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)的濃(nong)度值為縱(zong)坐標(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)紙上或用(yong)相關軟件繪制(zhi)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線(xian)，并得到直(zhi)線(xian)回歸(gui)方程，將樣品(pin)的OD值代入方程，計(ji)算出樣品(pin)的濃(nong)度。

試劑盒性能

• 檢測(ce)范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

• 靈敏度(du)：低檢測濃度(du)小于0.1 pg/mL。

• 特(te)異性：不與其它可溶性結構(gou)類似物交叉反應。

• 重復(fu)性：板內(nei)變(bian)異系數小于(yu)10% ，板間變(bian)異系數小于(yu)15% 。

說明

由于現(xian)有(you)條件及科學技術水平尚不能對所有(you)供貨商提供的所有(you)原料進行全面的鑒定與(yu)分析，本產品可能存(cun)在(zai)一(yi)定的質(zhi)量技術風(feng)險。

• 終的(de)實驗(yan)(yan)結果與(yu)試劑的(de)有效性、實驗(yan)(yan)者的(de)相關操作以及當時的(de)實驗(yan)(yan)環境密切相關，請務必準備充足的(de)標本備份。

• 不同(tong)批次的同(tong)一(yi)產品可(ke)能會有少(shao)許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間(jian)等，請依據(ju)試劑(ji)盒內說明書進行實驗操作(zuo)，網站電子版說明書僅作(zuo)參考。

• 只有全部使用(yong)本試劑(ji)盒配(pei)套試劑(ji)才能保(bao)證檢測效(xiao)果(guo)，不能混用(yong)其他(ta)商的產品。只有嚴格遵守本試劑(ji)盒的實驗說明才會得到*的檢測結果(guo)。

• 本公(gong)司只對試劑(ji)盒(he)本身負責，不對因(yin)使用該(gai)試劑(ji)盒(he)所(suo)造成的(de)樣本消(xiao)耗負責，請使用者使用前充(chong)分考慮到樣本的(de)可能使用量(liang)，預留充(chong)足的(de)樣本。

• 使用化學(xue)裂解(jie)液制備的(de)組織勻漿或細胞提(ti)取液可能(neng)會由(you)于某些化學(xue)物質的(de)引入導致ELISA實驗結果偏(pian)差。

• 若(ruo)樣(yang)(yang)本(ben)為細(xi)胞培養上(shang)清(qing)，因該類樣(yang)(yang)本(ben)干(gan)擾因素較(jiao)多，如：細(xi)胞狀態(tai)、細(xi)胞數量、采樣(yang)(yang)時間等，所以可(ke)能存在檢測(ce)不出(chu)的情況(kuang)。

• 某些天(tian)然蛋白(bai)或重(zhong)組蛋白(bai)，包括(kuo)原(yuan)核(he)及(ji)真核(he)重(zhong)組蛋白(bai)，可能因為與本產品所使用(yong)的檢測(ce)抗(kang)體及(ji)捕獲抗(kang)體不匹(pi)配，而(er)不被檢測(ce)出。